BIO

BIO是一种特异性的GSK-3抑制剂，无细胞试验中作用于GSK-3α/β的IC50为5 nM，比作用于CDK5选择性高16倍以上，也是一种泛JAK抑制剂。

特性

BIO是第一个维持人类和小鼠的胚胎干细胞自我更新的药理剂。

靶点

体外研究

BIO (6-bromoindirubin-3′-oxime)是特异性的GSK-3抑制剂，作用于GSK-3α/β，IC50为5 nM，比作用于CDK5选择性高16倍以上。BIO与这些激酶的ATP结合口袋相互作用，降低β-catenin在GSK-3特异性位点磷酸化。BIO作用于人类和小鼠胚胎干细胞，保持未分化表型，并维持多能状态特异性的转录表达因子Oct-3/4, Rex-1 和 Nanog表达。BIO-介导的Wnt信号激活是功能可逆的，撤掉化合物后，导致人类和小鼠胚胎干细胞的正常多元分化程序。BIO促进哺乳动物心肌细胞增殖。BIO也是pan-JAK抑制剂，作用于TYK2, JAK1, JAK2 和 JAK3，IC50值分别为0.03, 1.5, 8.0, 0.5 μM。BIO选择性抑制STAT3磷酸化，且诱导人类黑色素瘤细胞凋亡。

体内研究

BIO处理小鼠移植瘤模型，抑制黑色素瘤生长。

TWS119

MB5683

水溶性CHIR-99021

MB3813

GSK3787

MB4518

IM-12

1 mg

5 mg

10 mg

1 mM

2.8076 mL

14.0382 mL

28.0765 mL

5 mM

0.5615 mL

2.8076 mL

5.6153 mL

10 mM

0.2808 mL

1.4038 mL

2.8076 mL

50 mM

0.0562 mL

0.2808 mL

0.5615 mL

激酶实验:
在Buffer A 或 C中在30°C下进行激酶活性检测，ATP 终浓度为15 μM。减去空白值，活性计算为在10分钟温育期间渗透的皮摩尔磷酸盐。使用适当的DMSO稀释液作为对照。在一些情况下通过SDS-PAGE后放射自显影测评底物的磷酸化。通过亲和层析法，从猪脑中纯化GSK-3α/β。检测中, 在15 μM[γ-32P] ATP (3,000 Ci/mmol;1 mCi/ml) 存在时，含5 μl 40 μM GS-1肽, 一种特异性GSK-3底物(YRRAAVPPSPSLSRHSSPHQSpEDEEE)的1 mg BSA/ml 10 mM DTT在buffer A中按1/100稀释，终体积为30 μl。在30°C下温育30分钟后，25 μl上清液等分试样点样到2.5×3 cm Whatman P81磷酸纤维素纸片上，20秒后，过滤器在10 ml磷酸/升水的溶液中洗涤5次（每次至少5分钟）。在1 ml ACS闪烁液存在时，对湿的过滤器进行计数。

细胞实验：

• Cell lines:COS1, Hepa 或 SH-SY5Y 细胞
• Concentrations:~10 μM
• Incubation Time:12 或 24 小时
• Method:COS1, Hepa (野生型, CEM/LM AhR 缺陷和 ELB1 ARNT 缺陷), 或 SH-SY5Y细胞在6 cm 培养皿中生长，培养基为含10％胎牛血清的DMEM培养基。当细胞密度达到〜70％汇合上，IO (5 μM), BIO (5 或 10 μM), MeBIO (5或50 μM), LiCl (20或40 mM), 或模拟液 (DMSO, 终浓度为0.5% )加入到培养基中。12 小时(SH-SY5Y) 或24小时后 使用裂解缓冲液(1% SDS, 1 mM原钒酸钠, 10 mM Tris [pH 7.4])裂解仍在实验板上的细胞。裂解液通过26G针头数次，在10,000×g下离心5分钟，调整到相等蛋白质浓度。上样约8 μg每种样品，用于免疫印迹分析。增强的化学发光是用于检测。使用如下一抗：小鼠anti-β-catenin CT(识别总β-catenin), 小鼠anti-phospho-β-catenin(识别去磷酸化的β-catenin), 小鼠anti-GSK-3β, 小鼠anti-GSK-3 phosphoTyr216, 兔anti-AhR(芳香烃受体), 及兔anti-Actin。

动物实验：

• Animal Models:小鼠
• Formulation:在30% Solutol (Basf) 中新鲜配制，浓度为 10 mg/mL
• Dosages:50 mg/kg
• Administration:口服饲喂