BAF312 (Siponimod)

BAF312 (Siponimod)是一种二代S1P受体调节剂，选择性作用于S1P1和S1P5受体，EC50分别为0.39 nM和0.98 nM，比作用于S1P2， S1P3和S1P4受体选择性高1000倍以上。 Phase 3。

靶点

体外研究

BAF312 (Siponimod)是有效的选择性S1P受体激动剂，对S1P1和S1P5受体的EC50 为 0.39 nM 和 0.98 nM，表现出高于S1P2，S1P3和 S1P4受体1000多倍的选择性。[1]BAF312 (1 μM下1小时)促进91%S1P1受体的显著内化。

体内研究

BAF312通过内化S1P1受体，使其对淋巴结的出口信号不敏感，从而有效抑制大鼠脑脊髓炎(EAE)。BAF312以预防或治疗剂量0.3毫克/千克在小鼠体内显著降低临床评分。

SKI II

MB3757

JTE-013

MB3756

Ponesimod(ACT-128800)

1 mg

5 mg

10 mg

1 mM

1.9357 mL

9.6787 mL

19.3573 mL

5 mM

0.3871 mL

1.9357 mL

3.8715 mL

10 mM

0.1936 mL

0.9679 mL

1.9357 mL

50 mM

0.0387 mL

0.1936 mL

0.3871 mL

GTPγ[35S] 结合测试:
细胞均匀分布，并以26900 × g在4°C下离心30分钟。细胞膜重悬浮于20 mM HEPES (pH 7.4)，100 mM NaCl，10 mM MgCl2，1 mM EDTA 和 含0.1% 脱脂 BSA的2–3毫克蛋白质/毫升溶液中。GTPγ[35S]结合试验，通过细胞膜(75 毫克蛋白质/毫升)在50 mM HEPES，100 mM NaCl，10 mM MgCl2，20 微克/毫升皂苷和0.1%脱脂BSA (pH 7.4)，5 毫克/毫升小麦胚芽凝集素涂层的闪烁迫近分析珠子，以及10 μM GDP中培养进行10-15分钟。GTPγ[35S]结合反应通过加入200 pM GTPγ[35S]启动。在室温下进行120分钟后，将板以300 × g离心10分钟，并计数。

细胞实验：

• Cell lines:CHO
• Concentrations:~1 μM
• Incubation Time:1小时
• Method:激动剂介导的S1P1受体在CHO细胞中的内化作用，通过流式细胞术Myc标记的hS1P1细胞与激动剂，PBS清洗后，在标准培养基中于37°C下培育1小时进行分析。等分试剂在冰上保存3小时，另一等分试样在37°C下在培养基(不含激动剂)中放置3 (或12)小时。随后细胞与4微克/毫升单克隆鼠抗C-myc IgG1抗体或同型对照小鼠IgG1在4°C下培养60分钟，随后用1微克/毫升Alexa488标记的山羊抗小鼠二次结合物培育。细胞通过流式细胞术，每个样品使用10000活细胞进行测定。

动物实验：

• Animal Models:脑脊髓炎(EAE)大鼠模型
• Formulation:悬浮在1%含水的羧甲基纤维素中
• Dosages:0.03，0.3 和 3 毫克/千克
• Administration:口服灌胃