ADL5859 HCl

ADL5859 HCl是δ-opioid receptor激动剂，Ki为0.8 nM,选择性作用于opioid receptor κ,μ,对hERG通道具有微弱的抑制活性。

靶点

δ-阿片类受体

µ-阿片类受体

κ-阿片类受体

IC50

0.8 nM (Ki)

32 nM (Ki)

37 nM (Ki)

体外研究

在32nM和37nM Ki条件下ADL5859独立刺激δ-阿片类受体的特异选择性比µ-或者κ-阿片类受体高1000倍。在78uM IC50条件下，ADL5859表现出对hERG通道的弱的抑制效应。ADL5859对δ-阿片类受体的EC50值是20nM

体内研究

在3 mg/kg口服的筛选条件下, ADL5859在发炎爪子实验中可以造成100%的痛觉过敏逆转现象。ADL5859在FCA痛觉过敏机制实验中的口试ED50值是1.4 mg/kg.由ADL5859造成的抗痛觉过敏现象可以被δ-阿片类受体拮抗剂（0.3 mg/kg皮下注射纳曲吲哚）的预处理所逆转，因此证明了δ-阿片类受体参与介导反应。在大鼠强迫性游泳试验中，ADL5859(3 mg/kg口服)可以产生很强的与抗抑郁类似的作用,可以看到大鼠停顿时间的显著下降和游泳时间的显著上升。ADL5859(3 mg/kg口服)在大鼠和狗身上的生物利用度分别是33%和66%。ADL5859可以高效的减轻炎症反应和神经疼痛，它主要通过募集由外周Nav1.8表达神经元表达的δ-阿片类受体起作用

特征

ADL5859是一个潜在的、选择性的、口服的有生物活性的阿片类兴奋剂。

阿片受体拮抗剂

MB4790

Naltrexone HCL

MB5693

盐酸纳洛酮

1 mg

5 mg

10 mg

1 mM

2.3313 mL

11.6564 mL

23.3127 mL

5 mM

0.4663 mL

2.3313 mL

4.6625 mL

10 mM

0.2331 mL

1.1656 mL

2.3313 mL

50 mM

0.0466 mL

0.2331 mL

0.4663 mL

• Cell lines:稳定表达人κ、μ、和δ阿片类受体的中华仓鼠卵巢细胞系 (CHO)
• Concentrations:0 nM-10 nM
• Incubation Time:60 分钟
• Method:从稳定表达人κ、μ、和δ阿片类受体的中华仓鼠卵巢细胞中制备细胞膜。实验缓冲液中含有，50mM Tris(羟甲基)盐酸甲胺，PH 7.8；1.0 mM 乙二醇双(β-氨乙基醚)-N,N,N’,N’-四乙酸 (无EGTA酸)；5.0 mM MgCl2；10 mg/L 亮肽素,；10 mg/L 胃酶抑素 A； 200 mg/L 杆菌肽和 0.5 mg/L 抑肽酶。 用缓冲液稀释膜蛋白，用Polytron匀质化30秒后，将250μL含膜蛋白(10-80μg)的缓冲液加入到含有ADL5859和[3H]diprenorphine (0.5-1.0 nM, 25000-50000 dpm)的250μL缓冲液中。放置于96孔聚苯乙烯深孔检测板中，在室温孵育60分钟。反应通过真空过滤来终止，使用Brandel MPXR-96T 收集器让液体通过由0.5%聚乙烯亚胺和0.1%牛血清白蛋白预处理至少一个小时的GF/B滤膜。滤膜用1mL冰上预冷的50mM Tris-HCL, PH7.8溶液洗四次，然后将30μL的Microscint-20加入到每张滤纸上。每张滤纸的放射性用闪烁光谱法通过Packard TopCount 检测。[3H]Diprenorphine带有一个特定的50 Ci/mmolisused活性。[3H]Diprenorphine结合的检测值Kd对κ和μ受体是0.33nM, 对δ受体是0.26nM。受体蛋白表达水平通过Bmax值进行检测，用Scatchard法分析，κ、μ、和 受体分别是4400、4700和2100 fmol/mg蛋白。 初步实验结果表明，在洗膜过程中并没有特异性结合的损失，结合能力会在孵育过程中会达到一个平衡并能够在平衡点至少保持60分钟，并且结合能力相对于蛋白浓度呈现出一个线性规律。非特异性结合方面，检测10uM未标记的naloxone，产生的背景低于总结合数值的10%。蛋白浓度通过Bradford法进行定量。竞争性实验的数据通过非线性回归法进行处理，使用Prism软件的four-parameter equation法计算每一个竞争点，随后Ki值也通过Cheng-Prusoff equation用EC50值计算出来。

动物实验：

• Animal Models:Nav1.8-cKO 小鼠, CMV-KO 小鼠, C57BL6/J ×; SV129Pas 小鼠
• Formulation:配制在0.5% 羟丙基甲基纤维素，含有0.1% Tween-80
• Dosages:10 mg/kg – 300 mg/kg
• Administration:口服