分子式:C60H92N8O11 分子量:1101.42
简介:金担子素A(Aureobasidin A,AbA)是从丝状真菌Aureobasidiumpullulans No. R106中分离出来的环酯肽类抗生素,具有很强的抗真菌能力。是一种具有口服活性的环状肽抗生素。Aureobasidin A 是肌醇磷酸化神经酰胺合成酶 AUR1 的抑制剂。Aureobasidin A 有抗真菌 (antifungal ) 和抗寄生虫 (antiparasitic) 活性。
别名:Aureobasidin A,AbA,巴西芬净,Basifungin
物理性状及指标:
外观:…………………白色至类白色粉末
溶解性:………………DMSO:39mg/mL;Ethanol:19mg/mL
纯度:…………………>95%
储存条件:2-8℃,避光防潮密闭干燥
运输条件:常温运输
产品用途:科研试剂,广泛应用于分子生物学、药理学等科研方面,严禁用于人体。金担子素A在较低的浓度下(0.1-0.5 μg/ml)即可对酵母产生毒性。对其敏感的真菌种类包括:出芽酵母(Saccharomyces cerevisiae)、粟酒裂殖酵母(Schizosaccharomycespombe)、光滑念珠菌(Candida glabrata)、构巢曲霉(Aspergillusnidulans)和黑曲霉(A. niger.)。作用机制在于AbA抑制了真菌生长所依赖的肌醇磷酰胺(inositol phosphorylceramide,IPC)合成酶的活性,干扰鞘脂合成,从而进一步杀死菌株。编码IPC合成酶的基因研究较多的有来自酿酒酵母菌的AUR1 基因,以及构巢曲霉的AURA基因,两者具有同源性。通过对这些编码基因进行突变即可使得菌株对AbA产生抗性,如AUR1-C基因。
生物活性:(来自公开文献,仅供参考)
AbA非常适合用作阳性克隆子筛选用的药物选择性标记。AbA抗性也是酵母单/双杂交研究中理想的报告子。具体的工作浓度取决于宿主细胞的敏感度(见表1)。
表1 AbA对各种酵母菌的最低抑菌浓度
菌株 | MIC(µg/ml) | |
S.cerevisiae | ATCC9763(diploid) | 0.2-0.4 |
SH3328(haploid) | 0.1 | |
Sake yeast(diploid) | 0.1-0.2 | |
Shochu yeast(diploid) | 0.1 | |
Beer yeast(triploid or tetraploid) | 0.1 | |
Baker’s yeast(diploid) | 0.2-0.4 | |
Schizo.pombe | JY-745(monoploid) | 0.1 |
C.albicans | TIMM-0136(diploid) | 0.04 |
C.tropicalis | TIMM-0324(diploid) | 0.08 |
使用方法:(抗AbA的酵母转化系统,来自公开文献,仅供参考)
- 加入5 ml过夜培养的酵母到50 ml YPD培养基中(配方:1L液体培养基含有10g yeast extract,20g polypeptone, 20g D-glucose;固体培养基另外加入2%琼脂)。
- 30℃培养约6小时,测定OD660为1~2。使用二倍体时,测定OD660为2~4。
- 1,000×g离心5分钟。
- 用10 ml Solution A(配方:100 mM Lithium acetate,10 mMTris-HCl pH 7.5,1 mM EDTA)悬浮沉淀,1,000×g离心5分钟。
- 用Solution A重悬沉淀,直到OD660为150。
- 在管内分取100 µl细胞悬浮液,30℃培养1小时。
- 加入5 μg载体(环状或线性DNA)和150 μg Carrier DNA(已经过100℃加热10分钟,并迅速冷却)。
【注】:pAUR101需使用线性DNA进行转化。使用环状DNA会降低转化效率甚至转化不成功。pAUR112和pAUR123需使用完整的质粒DNA进行转化。
- 加入850 µl Solution B(配方:取40 g Polyethylene Glycol 4000溶于100 ml Solution A充分溶解,需要现用现配),轻轻混匀。
- 30℃培养30分钟后,42℃培养15分钟。
- 室温放置10分钟。
- 5,000 rpm离心1分钟,用5 ml YPD培养基悬浮沉淀。
- 30℃培养6小时~过夜。
- 5,000~10,000 rpm离心,用1-10 ml 0.9% NaCl悬浮沉淀。
- 在YPD选择培养基平板(含有一定浓度的AbA,依菌株类型而定)上接种100 µl细胞悬液。30℃培养3-4天后转化完成。
- 挑取阳性转化子,和/或测定转化效率(以每微克质粒DNA转化的菌落数来表示)。
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【注意】
- AbA的最佳工作浓度因宿主细胞不同而有差异,可根据最低抑菌浓度(MIC)来确定。
- 我司产品为非无菌包装,若用于细胞培养,请提前做预处理(如0.22μm滤膜过滤),除去热原细菌,否则会导致染菌。
- 部分产品我司仅能提供部分信息,我司不保证所提供信息的权威性,以上数据仅供参考交流研究之用。
参考文献:
[1]. Zheng L, et al. Chromosome 1 trisomy confers resistance to aureobasidin A in Candida albicans. Front Microbiol. 2023 Mar 17;14:1128160.
[2]. Alqaisi AQI, et al. The antifungal Aureobasidin A and an analogue are active against the protozoan parasite Toxoplasma gondii but do not inhibit sphingolipid biosynthesis. Parasitology. 2018 Feb;145(2):148-155.
[3]. Takesako K, et al. Biological properties of aureobasidin A, a cyclic depsipeptide antifungal antibiotic. J Antibiot (Tokyo). 1993 Sep;46(9):1414-20.