PIK-75

PIK-75是p110α抑制剂，IC50为5.8 nM (比作用于p110β效果高200倍),也有效抑制DNA-PK，IC50为2 nM。

靶点

DNA-PK
(Cell-free assay)

p110α
(Cell-free assay)

p110γ
(Cell-free assay)

p110δ
(Cell-free assay)

IC50

2 nM

5.8 nM

76 nM

0.51 μM

体外研究

与纯化的p110α结合, PIK-75是非竞争性抑制剂，Ki为36 nM。PIK-75也有效抑制DNA-PK，IC50为2 nM。PIK-75 (1 μM)通过显著降低无刺激的非哮喘气道平滑肌细胞（ASM），哮喘ASM细胞,和肺成纤维细胞的线粒体活性，降低细胞寿命。PIK75作用于TGFβ刺激的ASM细胞,只降低哮喘细胞中的线粒体活性，而对非哮喘细胞没有作用效果。最新研究显示PIK-75 (10 nM)作用于气道平滑肌细胞（ASM），抑制TNF-α诱导的CD38 mRNA表达，且显著降低TNF-α诱导的ADP-核糖环化酶活性。

体内研究

PIK-75作用于ErbB3WT肿瘤模型，降低HRGβ1趋化反应，且降低40% pAkt水平。此外, PIK-75作用于ErbB3WT原发性肿瘤，显著降低肿瘤细胞运动，和入侵。PIK-75作用于CD1雄鼠，导致胰岛素耐量试验（ITT）和糖耐量试验（GTT）严重损伤，且在丙酮酸糖耐量试验（PTT）期间糖产量提高。

BGT226 (NVP-BGT226)

MB5532

BYL719

MB3572

CAY10505

1 mg

5 mg

10 mg

1 mM

2.0461 mL

10.2304 mL

20.4608 mL

5 mM

0.4092 mL

2.0461 mL

4.0922 mL

10 mM

–

–

–

50 mM

–

–

–

抑制实验:
PI3K抑制剂PIK-75溶于10 mM DMSO，然后储存于−20oC。在50 μL 20 mM HEPES, pH 7.5, 和5 mM MgCl2，180 μM 磷脂酰肌醇的混合物中测定PI3K酶活性，加入100 μM ATP (含2.5 μCi [γ-32P]ATP)开始反应。在室温下温育30分钟，通过加入 50 μL of 1 M HCl终止酶反应。使用100 μL氯仿/甲醇[1:1 (v/v)] 和250 μL 2 M KCl 抽提磷脂，然后使用液体闪烁计数器计数。抑制剂在 20% (v/v) DMSO中稀释，然后获得浓度对酶活性抑制曲线，使用Prism version 5.00 用于Windows系统分析，计算 IC50曲线。动力学分析中，使用荧光实验测定 ATP 消耗。在 50 μL 20 mM HEPES, pH 7.5, 和 5 mM MgCl2，PI 及不同浓度ATP中，测定PI3K酶活性。在室温下温育60分钟后，加入50 μL Kinase-Glo终止反应，然后再温育15分钟。使用Fluostar 酶标仪测定光值。使用Prism分析结果。

细胞实验：

• Cell lines:A2780, A2780/cp70, 2780AD, HCT116, HT29, WIL, CALU-3, MCF7, PC3 和 HS852
• Concentrations:0 到10 μM
• Incubation Time:48 小时
• Method:TGFβ刺激后，通过MTT实验测定线粒体活性。收集冲洗的细胞再悬浮在 DMEM-l0% FCS 中，等分(500 μL) 装到24孔板中，然后连续稀释 (1:2) 。细胞稀释后，每孔立即加入 100 μL 合适浓度MTT(溶于PBS，通过0.2 μm 过滤器过滤，用于移动任何蓝色甲臜产品)，然后在37oC下温育3.5小时。通过在每孔0.01 M HCl 中加入500 μL 10% SDS ，产生的甲臜溶液在37oC 下再过夜（16小时）溶解。重复孔中的样本(150　μL)转移到96 孔板上，使用分光光度计自动测定作用于空白试剂（无细胞）的光密度。在实验波长为570 nm 处，参考波长为 690 nm处测定吸光值。测定每组原代培养细胞，取3到6个孔的平均值，数据表示为570 到690 nm处吸光值。

动物实验：

• Animal Models:右四乳腺脂肪垫注射MTLn3细胞的雌性严重联合免疫缺陷/NCR小鼠
• Formulation:PIK-75 PIK-75 溶于DMSO，然后在PBS中稀释
• Dosages:≤1 μM
• Administration:腹腔注射