KU-60019

KU-60019是一种改进的KU-55933类似物，在无细胞试验中作用于ATM，IC50为6.3 nM，作用于ATM比作用于DNA-PK和ATR的选择性分别高270和1600倍，并且是高度有效的放射增敏剂。

特性

KU-60019是KU-55933改善的类似物, 更加有效阻断ATM调节的DDR活动。

靶点

ATM(Cell-free assay) 6.3 nM

体外研究

与KU-55933作用于ATM时IC50为13 nM 相比，KU-60019是 改进的 ATM激酶的水溶性抑制剂，IC50为6.3 nM,而靶点特异选择性是相似的。KU-60019作用于DNA-PKcs和 ATR几乎没有活性，IC50为1.7 μM 和>10 μM,作用于229种其他蛋白激酶，如 PI3K, mTOR mTOR/FKBP12时也没有活性。作用于人胶质瘤U87和U1242 细胞时，阻断放射诱导的关键ATM 蛋白靶点如p53,γ-H2AX,和CHK2的磷酸化，KU-60019效果比 KU-55933 强3到10倍，1 μM KU-60019显著诱导p53(S15)磷酸化降低，降低达70% 以上，而~10 μM KU-55933 才能达到相同降低程度。KU-60019有效使人胶质瘤细胞 放射敏感化，按1 μM 和10 μM处理，剂量增强比分别为1.7 和 4.4, 也使正常成纤维细胞而不是 A-T成纤维细胞放射敏感化。3 μM KU-60019 抑制基本的和胰岛素诱导的 AKT S473磷酸化，抑制分别达 70%和~50%,且完全降低放射诱导的 AKT 磷酸化，使其降低到对照组水平以下。 KU-60019作用于AKT S473磷酸化的效果可在胶质瘤细胞系和正常成纤维细胞而非 A-T(h-TERT) 细胞中观察到，可被磷酸酶抑制剂okadaic acid有效抑制,说明 在调节AKT 磷酸化方面ATM激酶的关键作用。与抑制促生存 AKT信号相一致, 3 μM KU-60019 显著抑制人胶质瘤U87细胞 迁移和入侵，抑制分别为>70%和~60%,也抑制 U1242 细胞迁移和入侵，抑制分别为>50% 和~60%。

体内研究

在原位胶质瘤U1242/lu – gfp异种移植模型中，KU-60019联合放疗比单独、单独放疗或不加放疗明显提高小鼠的生存率。此外，p53突变胶质瘤对KU-60019放射增敏的敏感性远高于野生型胶质瘤。

AZD0156

MB3971

CGK733

MB3895

KU-55933

1 mg

5 mg

10 mg

1 mM

1.8259 mL

9.1296 mL

18.2592 mL

5 mM

0.3652 mL

1.8259 mL

3.6518 mL

10 mM

0.1826 mL

0.9130 mL

1.8259 mL

50 mM

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Cell lines:U87和U1242

• Concentrations:溶于水,终浓度为~3 μM
• Incubation Time:1, 3, 和5天
• Method:使用KU-60019处理细胞1, 3,和 5天。通过AlamarBlue测定细胞生长。AlamarBlue加到培养基中，达到推荐的最终浓度。实验板在37oC下温育1小时，在Fluoro-Count酶标仪上(激发光530 nm,发射光590 nm)测定荧光值, 测定结果昨晚衡量细胞生长的一个指标。通过台酚蓝/荧光激活的细胞分选(FACS)实验测定细胞存活。

动物实验

Animal Models:Athymic female mice harboring orthotopic glioma U1242/luc-GFP tumors or human glioma U1242/luc-GFP tumors

• Formulation:PBS
• Dosages:KU-60019 (10 μM) is delivered at a rate of 0.5 μL/h by osmotic pump; KU-60019 (250 μM) in 12.5 μL is infused by CED.
• Administration:Administered intratumorally by convection-enhanced delivery or osmotic pump