NVP-AEW541

NVP-AEW541是一种有效的IGF-1R/InsR抑制剂，在无细胞试验中IC50为150 nM/140 nM，在细胞试验中对IGF-1R具有较高的作用和选择性。

靶点

体外研究

在纯化的激酶/重组激酶域实验中，NVP-AEW541也抑制InsR, Tek, Flt1 和 Flt3，IC50分别为140 nM, 530 nM, 600 nM 和 420 nM。在细胞水平，NVP-AEW541选择性更高，比InsR选择性高27倍。NVP-AEW541抑制IGF-I调节的生存，软琼脂，和MCF-7细胞增殖，IC50分别为0.162 μM, 0.105 μM 和 1.64 μM。NVP-AEW541作用于NWT-21细胞，也降低 p-IGF-IR 和 p-PKB 水平。NVP-AEW541 作用于培养在低血清培养基和含10% FBS的培养基中的TC-71肌肉骨骼肉瘤细胞，抑制生长。NVP-AEW541作用于肉瘤细胞系(TC-71, SK-N-MC, SaoS-2, RD/18 和 RH4)，抑制细胞周期进展和诱导细胞周期在G1期停顿。NVP-AEW541可抑制神经母细胞瘤细胞生长,IC50为0.4-6.8 μM。在这些细胞中可以检测到亚二倍体片段增多及 S和 G2-M 期细胞消耗。在神经母细胞瘤细胞中，NVP-AEW541驱动的 IGF-IR 受抑制，可降低 Akt磷酸化,而不是Erk1和Erk2磷酸化。NVP-AEW541 抑制神经胶质瘤细胞生长，且破坏HIF1α 稳定化启动的自分泌环。最新研究显示NVP-AEW541抑制 PC3, DU145, 和22Rv1 前列腺癌细胞增殖和活性。NVP-AEW541 作用于22Rv1和 DU415 细胞而不是PC3细胞，降低 p-Akt水平，不会影响整体Akt水平，说明PTEN状态可决定NVP-AEW541的有效性。NVP-AEW541诱导的放射敏感度决定于Akt 激活状态。NVP-AEW541作用于PC3, DU145, 和 22Rv1细胞，可提高H2AX 磷酸化。

体内研究

NVP-AEW541(50 mg/kg, 口服处理)作用于NWT-21移植瘤，导致基础型和IGF-I诱导型受体的废除，也抑制 PKB和MAPK磷酸化，T/C 值为14%。NVP-AEW541(50 mg/kg) 作用于HTLA-230和 SK-N-BE2c移植瘤，引起肿瘤缩小，没有全身毒性迹象。NVP-AEW541作用于Matrigel包被的细胞和HTLA-230移植瘤，可以抑制肿瘤入侵。

OSI-906 (Linsitinib)

MB3909

PQ401

MB3905

BMS-754807

MB3908

GSK1838705A

1 mg

5 mg

10 mg

1 mM

2.2751 mL

11.3753 mL

22.7505 mL

5 mM

0.4550 mL

2.2751 mL

4.5501 mL

10 mM

0.2275 mL

1.1375 mL

2.2751 mL

50 mM

0.0455 mL

0.2275 mL

0.4550 mL

体外酶法测定:
NVP-AEW541溶解在DMSO(10 mM) 中，储存在-20oC下。稀释液在1:1的DMSO/水中现配。在酶法测定中DMSO的最终浓度<0.5 %。蛋白激酶实验在96孔板上进行，加入20 μl 125 mM EDTA终止反应。随后, 30 μl (c-Abl, c-Src, IGF-1R) 反应混合物转移到Immobilon-P转印膜上，加入甲醇预浸泡5分钟,用水冲洗, 然后加入0.5 % H3PO4浸泡5分钟，然后装在真空管中。识别所有样本后，用200 μl 0.5 % H3PO4冲洗每孔。分离膜，在搅拌器上用1.0 % H3PO4冲洗4次，其中一次加入乙醇。烘干后，建立Packard TopCount 96孔框架，每孔加入10 μl Microscint, 膜计数。通过线性回归分析NVP-AEW541在四种不同浓度(0.01, 0.1, 1, 和10 μM)下的抑制百分数来计算IC50值。37oC下，每分钟，每毫克蛋白中，[γ33P]ATP转化到底物蛋白中的1 nM33P表示蛋白激酶活性。

细胞实验

• Cell lines:MCF-7细胞
• Concentrations:30到300 nM
• Incubation Time:30分钟
• Method:NVP-AEW541直接加到琼脂培养基中，最终浓度为30到300 nM。MCF7生长培养基中下层包括每孔0.5 ml 细菌琼脂。包被培养板，储存在孵育器中(37oC, 5% CO2)至少30分钟，固定培养基，然后加入上层琼脂。在生长培养基的0.5ml上层0.4%琼脂中每孔接种5×103个MCF-7细胞。在37oC, 5% CO2环境下温育3周后, 细胞混合, 用结晶紫染色,计数阳性菌落(直径>40 μm),使用KS-400图像分析系统测定转化效率。

动物实验

• Animal Models:携带NWT-21细胞的Harlan无胸腺裸鼠，体重为18-25 g
• Formulation:溶解在25 mM L(+)-酒石酸
• Dosages:20, 30,或50 mg/kg; 10 ml/kg
• Administration:每天口服处理2次，每周处理7天