Motesanib Diphosphate (AMG-706)

Motesanib Diphosphate (AMG-706)是有效的ATP竞争性的VEGFR1/2/3抑制剂，IC50分别为2 nM/3 nM/6 nM;对Kit具有相似的抑制活性,作用于VEGFR比作用于PDGFR和Ret选择性高10倍。

靶点

VEGFR1Cell-free assay)

VEGFR2Cell-free assay)

VEGFR3Cell-free assay)

VEGFR2/Flk1Cell-free assay)

KitCell-free assay)

IC50

2 nM

3 nM

6 nM

6 nM

8 nM

体外研究

Motesanib Diphosphate作用于人VEGFR家族具有广谱活性，作用于EGFR, Src,和p38激酶选择性>1000。与选择性相一致, Motesanib Diphosphate显著抑制VEGF诱导的HUVECs细胞增殖，IC50为10 nM,而对bFGF诱导的增殖没有效果，IC50为>3,000 nM。Motesanib Diphosphate也有效抑制PDGF诱导的增殖和SCF诱导的c-kit磷酸化，IC50分别为207 nM和37 nM,但是作用于EGF诱导的EGFR磷酸化和A431细胞活性没有效果。虽然作用于HUVECs不具有抗增殖活性，但是Motesanib Diphosphate却使细胞对放射性很敏感。

体内研究

Motesanib Diphosphate按100 mg/kg剂量处理，显著抑制VEGF诱导的血管通透性，这种作用存在时间依赖性。Motesanib Diphosphate每天口服处理大鼠角膜模型两次或一次，有效抑制VEGF诱导的血管生成，这种作用存在剂量依赖性，ED50分别为2.1 mg/kg和4.9 mg/kg。Motesanib Diphosphate作用于肿瘤细胞，通过选择性靶向作用于血管新生而使A431移植瘤衰退，这种作用存在剂量依赖性。Motesanib Diphosphate处理MCF-7, MDA-MB-231,或Cal-51移植瘤，显著降低肿瘤生长和血管密度，这种作用存在剂量依赖性，而和Docetaxel或Tamoxifen联用时则显著增强。Motesanib Diphosphate和辐射作用一起作用于头部和颈部鳞状细胞癌（HNSCC）移植瘤模型，具有显著抗癌活性。

Foretinib (GSK1363089)

MB3943

Golvatinib (E7050)

MB3945

Ki8751

1 mg

5 mg

10 mg

1 mM

1.7561 mL

8.7806 mL

17.5611 mL

5 mM

0.3512 mL

1.7561 mL

3.5122 mL

10 mM

0.1756 mL

0.8781 mL

1.7561 mL

50 mM

0.0351 mL

0.1756 mL

0.3512 mL

体外激酶实验:
通过同质时间分辨荧光(HTRF)检测测定酶, ATP, 和底物(胃泌素肽)的最佳浓度。通过每组酶的10点剂量反应曲线 测定Motesanib Diphosphate。大部分实验组包含酶和激酶反应 [20 mM Tris-HCl (pH 7.5), 10 mM MgCl2, 5 mM MnCl2, 100 mM NaCl,1.5 mM EGTA]。每组实验前加入终浓度为 1 mM DTT, 0.2 mM NaVO4, 和 20 μg/mL BSA。所有实验中, HTRF反应前立刻加入5.75 mg/mL链霉亲和素—别藻蓝蛋白和0.1125 nM Eu-PT66。实验板在室温下温育30分钟，然后使用探测仪读数。 计算IC50值。

细胞实验

• Cell lines:A431, MO7e, HUVEC和NHDF
• Concentrations:溶于DMSO,终浓度为~25 μM
• Incubation Time:2小时
• Method:使用不同浓度Motesanib Diphosphate和细胞预温育2小时，然后再使用50 ng/mL VEGF 或20 ng/mL bFGF处理72小时。 使用DPBS冲洗细胞两次,然后将实验板置于-70oC冻存24小时。加入 CyQuant染料测定增殖,然后在Victor 1420工作台上读数。测定IC50值。

动物实验

• Animal Models:具有角膜新生血管的雌性Sprague-Dawley 大鼠，皮下注射A431细胞的雌性CD-1 nu/nu 小鼠
• Formulation:在 Ora-Plus 媒介中配成成悬液，调节pH 为2.0
• Dosages:~100 mg/kg
• Administration:口服处理，每天一次或两次