BMS-777607

BMS-777607是Met相关的抑制剂，作用于c-Met,Axl,Ron和Tyro3时，IC50分别为3.9 nM, 1.1 nM, 1.8 nM和4.3 nM,作用于Met相关靶点比作用于Lck, VEGFR-2,和TrkA/B选择性高40倍,比作用于其他受体和非受体激酶选择性高500多倍。

靶点

Met

Axl

Ron

Tyro3

Mer

IC50

3.9 nM

1.1 nM

1.8 nM

4.3 nM

14 nM

体外研究

BMS-777607是ATP竞争性Met激酶选择性抑制剂，有效抑制c-Met自磷酸化，作用于GTL-16细胞裂解物，IC50为20 nM，且选择性抑制Met驱动的肿瘤细胞系如GTL-16细胞系, H1993和U87增殖。BMS-777607作用于DU145前列腺癌细胞，抑制肝细胞生长因子(HGF)引起的c-Met自磷酸化，IC50<1 nM。BMS 777607对肿瘤细胞生长作用效果不大，但是作用于PC-3和DU145细胞，抑制HGF诱导的细胞分散。BMS 777607作用于这两种细胞，也抑制刺激的细胞迁移和入侵，IC50<0.1 μM，这种作用存在剂量依赖性。BMS 777607(~10 μM)作用于高度转移性鼠科KHT细胞2小时，有效清除自磷酸化的c-Met水平，IC50为10 nM，不影响全部c-Met,导致下游信号分子包括ERK, Akt, p70S6K和S6受抑制，这种作用存在剂量依赖性。纳摩尔级BMS-777607(~1 μM)处理24小时,有效抑制KHT细胞分散，活动，和入侵，这与MET基因抑制相关,适当影响细胞增殖和集落形成。

体内研究

BMS 777607按6.25-50 mg/kg剂量口服处理给药携带GTL-16人类移植瘤的无胸腺小鼠，明显降低肿瘤体积，且没有毒性。BMS 777607按25 mg/kg剂量每天处理6-8周大的注射啮齿类纤维肉瘤KHT细胞的雌性C3H/HeJ小鼠，降低KHT肺肿瘤结节数量,提高形态出血,且明显修复损害转移表型，与对照组相比，没有明显毒性。BMS 777607按10 mg/kg低剂量处理，也适度但不显著抑制肺结节形成。

特征

BMS 777607是有效的Met家族成员抑制剂，比作用于Lck, VEGFR-2,和TrkA/B的选择性高40多倍，比作用同样其他受体和非受体激酶选择性高500多倍。

JNJ38877605

MB3950

MK-2461

MB8803

PHA-665752

MB9673

Tivantinib (ARQ 197 )

1 mg

5 mg

10 mg

1 mM

1.9497 mL

9.7487 mL

19.4974 mL

5 mM

0.3899 mL

1.9497 mL

3.8995 mL

10 mM

0.1950 mL

0.9749 mL

1.9497 mL

50 mM

0.0390 mL

0.1950 mL

0.3899 mL

Met Kinase检测：
激酶反应由表达GST-Met的杆状病毒，3μg聚（Glu / Tyr），0.12μCi33Pγ-ATP，30μL激酶缓冲液中的1μMATP（20 mM Tris-Cl，5 mM MnCl2,0.1 mg）组成 / mL BSA，0.5mM DTT）。 将反应在30℃温育1小时，并通过加入冷的三氯乙酸（TCA）终止至终浓度为8％。 使用Filtermate通用收集器将TCA沉淀物收集到GF / C unifilter板上，并使用TopCount 96孔液体闪烁计数器对过滤器进行定量。 产生剂量响应曲线以确定抑制50％底物磷酸化所需的浓度（IC 50）。 将BMS 777607以10mM溶于二甲基亚砜（DMSO）中，并以10个浓度评估，一式两份。

细胞实验

Cell lines:啮齿类纤维肉瘤KHT细胞

• Concentrations:溶于DMSO，作为储存液(10 mM), 终浓度为10 μM 左右
• Incubation Time:2, 24和96小时
• Method:用连续稀释的BMS 777607 处理KHT细胞96小时，然后进行MTT实验和台酚蓝排除，分别测定细胞增殖和细胞死亡。KHT细胞集落和BMS 777607温育24小时，然后用结晶紫(0.1%)染色，然后显影，测定细胞分散情况。使用无菌的1 ml吸管端在融合的KHT单层细胞上划2 mm 痕，随后用BMS-777607处理24小时，在4块随机区域中计数迁移到剥蚀地细胞数，用于测定细胞迁移情况。为了测定细胞入侵，用Matrigel预包被的转移嵌入板(8 μm 孔膜)，和无血清培养基在有或无BMS 777607存在时，在37oC下温育2小时,使Matrigel再水化。悬浮在无血清培养基上的细胞装到小室顶端，悬浮在含10% FBS的完全培养基上的细胞装到小室底端，作为化学引诱物。温育24小时，移除 Matrigel，用结晶紫染色。显影并计数在滤液下面的入侵细胞。

动物实验

• Animal Models:携带啮齿类纤维肉瘤KHT细胞的雌性C3H/HeJ小鼠
• Formulation:溶于DMSO，作为储存液(10 mM)
• Dosages:10-25 mg/kg
• Administration:饲喂处理，每天一次