WHI-P154

WHI-P154是有效的JAK3抑制剂，IC50为1.8 μM,对JAK1和JAK2没有抑制活性，也抑制EGFR, Src, Abl, VEGFR和MAPK，抑制Stat3,而非Stat5磷酸化。

靶点

JAK3

EGFR

VEGFR

Src

IC50

1.8 μM

4 nM

100 nM

100 nM

体外研究

WHI-P154是第一个只抑制JAK3而对JAK1和JAK2没有活性的抑制剂。WHI-P154在体外抑制巨噬细胞中STAT1激活，iNOS表达以及NO产生。但是研究证明WHI-P154还可以抑制其它常见激酶包括EGFR, Src, Abl, VEGFR, MAPK和PI3-K并且在人恶性胶质瘤细胞系中诱导细胞凋亡。WHI-P154在细胞外基质（ECM）存在情况下抑制恶性胶质瘤细胞粘连和迁移[2]。WHI-P154对人恶性胶质瘤细胞系U373和U87具有明显的细胞毒性，在微摩尔浓度便可以诱导细胞凋亡。在体外WHI-P154的抗恶性胶质瘤活性放大200多倍并且通过结合重组人源表皮生长因子而具有选择性。在体外纳摩尔浓度EGF-P154可以杀死恶性胶质瘤细胞，IC50为813 nM,但是即使浓度高到100 mM对不表达EGF-R的白血病细胞也没有细胞毒性。

体内研究

体内使用EGF-P154可以延迟肿瘤进展和改善重度联合免疫缺陷小鼠胶质母细胞瘤移植瘤模型的无瘤生存率。然而无瘤小鼠生存期都没有超过33天(无瘤生存期中值为19天)，有瘤小鼠在58天内肿瘤体积会迅速大于500 mm3,用1 mg/kg/天EGF-P154连续治疗10天的小鼠中有40%活下来并且58天以上没有检测到肿瘤，无瘤生存期中值为40天。剩下的60%小鼠中肿瘤体积从未超过50 mm3。

Tofacitinib (CP-690550) Citrate

MB4155

托法替尼;CP-690550

MB3980

PD153035 HCl

1 mg

5 mg

10 mg

1 mM

2.6582 mL

13.2908 mL

26.5816 mL

5 mM

0.5316 mL

2.6582 mL

5.3163 mL

10 mM

0.2658 mL

1.3291 mL

2.6582 mL

50 mM

0.0532 mL

0.2658 mL

0.5316 mL

激酶分析:
WHI-P154在激酶分析中检测。选择可以很好代表蛋白激酶组的激酶种类来保证特异性。对于所有的激酶，体系中使用重组鼠源IKKβ或人源(所有其它种类), 全长或 GST标签的激酶区域融合蛋白。WHI-P154(IC50> 30 μM)在下列激酶实验中是没有活性的: AKT, AuroraA, cdk2, cdk6, CHK1, FGFR1, GSK3b, IKKb, IKKi, INSR, MAPK1, MAPKAP-K2, MASK, MET, PAK4, PDK1, PKCb, ROCK1, TaoK3, TrkA。

细胞实验

• Cell lines:U87, U737
• Concentrations:0.1-250 μM
• Incubation Time:24 – 36小时
• Method:细胞接种在96孔板中，每孔2.5 × 104个，加入药物前 37 ℃培养36小时。实验当天小心吸走旧的培养基换入新的含有化合物 WHI-P154的培养基，化合物浓度范围是0.1 μM到250 μM。每个实验重复三份样品。在湿润并含有5% CO2条件下细胞与化合物37度培养24到36小时。每孔加入10 μL MTT (终浓度0.5 mg/mL)，平板37 ℃孵育 4 小时。在含有10% SDS 溶液中37 ℃溶解过夜。利用酶标仪测量每孔570 nm处吸光度。

动物实验

• Animal Models:人恶性胶质瘤异种移植的严重联合免疫缺陷模型
• Formulation:溶于PBS
• Dosages:0.5 mg/kg或1 mg/kg连续10天
• Administration:腹腔注射