SAR131675

SAR131675是一种VEGFR3抑制剂，无细胞试验中IC50/Ki为23 nM/12 nM，作用于VEGFR3比作用于VEGFR1/2选择性高50和10倍，对Akt1， CDKs， PLK1， EGFR， IGF-1R， c-Met， Flt2等几乎没有作用活性。

特性

SAR131675是一种强有效和选择性的VEGFR-3酪氨酸激酶抑制剂

靶点

体外研究

SAR131675抑制VEGFR-3配体VEGFC和VEGFD诱导的原代人淋巴结细胞的增殖并且具有剂量依赖特性，IC50约为20 nM，也会抑制rh-VEGFR-3–TK的活性并具有剂量依赖特性，IC50为23 nM。SAR131675抑制VEGR-3–TK活性， Ki值约为12 nM。SAR131675抑制VEGFR-1–TK 活性，IC50大于3μM，抑制VEGFR-2–TK活性，IC50为235 nM。SAR131675 抑制 VEGFR-1自身磷酸化，IC50 约为1 μM，抑制VEGFR-2自身磷酸化，IC50 约为280 nM。SAR131675适度抑制VEGFR-2 但对VEGFR-1基本没有作用, 这表明它具有对VEGFR-3很好的选择性。 SAR131675抑制VEGFA诱导的VEGFR-2磷酸化并具有剂量依赖特性，IC50为239 nM。 SAR131675 强有效的抑制VEGFC和 VEGFD诱导的淋巴细胞存活，IC50分别为14nM和17 nM，抑制VEGFA诱导的淋巴细胞存活，IC50为664 nM。SAR131675显著抑制VEGFC诱导的Erk 磷酸化并具有剂量依赖特性，IC50约为30 nM。

体内研究

在利用斑马鱼模型研究胚胎血管生成的实验中，SAR131675 有效的破坏了胚胎的血管生成。100 mg/kg/天剂量的SAR131675使得 VEGFR-3和血红蛋白含量显著降低50%左右。 SAR131675在体内有效破坏了FGF2诱导的淋巴管生成和血管生成。300mg/kg SAR131675可以抑制VEGFR-2和VEGFR-3的信号。在预防实验中使用SAR131675进行 5 周治疗表明SAR131675耐受性良好并且与对照相比治疗后的小鼠胰腺中血管生成下降42%。干预研究显示从第10周到12.5周每天口服使用SAR131675可以使肿瘤负担减轻62%。30 mg/kg/天和100mg/kg/天SAR131675治疗后可以使肿瘤体积分别减小24% 和50%

Golvatinib (E7050)

MB3945

Ki8751

MB3920

KRN633

1 mg

5 mg

10 mg

1 mM

2.7903 mL

13.9513 mL

27.9026 mL

5 mM

0.5581 mL

2.7903 mL

5.5805 mL

10 mM

0.2790 mL

1.3951 mL

2.7903 mL

50 mM

0.0558 mL

0.2790 mL

0.5581 mL

酪氨酸激酶活性分析:
多孔培养板预先铺垫合成高分子底物poly-Glu-Tyr (polyGT 4:1)。反应在激酶缓冲液(10 ×: 50 mM HEPES 缓冲液, pH 7.4, 20 mM MgCl2, 0.1 mM MnCl2和0.2 mM Na3VO4)中进行，正对照加入 ATP 和DMSO (C+)或SAR131675 (浓度范围3 nM–1,000 nM)。30 μM ATP用于VEGFR-1和VEGFR-3，15 μM用于VEGFR-2。 用HRP(HRP; 1/30,000)标记的磷酸酪氨酸特异性单抗(mAb)来识别磷酸化的poly-GT，在黑暗处用HRP显色底物(OPD)进行反应。加入100μL 1.25M H2SO4终止反应，利用Envision分光光度计测量492 nm处吸光度。

细胞实验

• Cell lines:HLMVEC细胞
• Concentrations:0 μM -1 μM
• Incubation Time:30 分钟
• Method:细胞转染24小时后原钒酸盐(100 mM)处理1小时然后收集计数，转移至5-mL管子中，加入预定浓度的SAR131675。孵育30分钟，加入含有原钒酸盐的预冷PBS终止反应。用150 μL放射免疫沉淀实验分析(RIPA)缓冲液4°C裂解细胞15分钟以上，10,000g离心10分钟。上清液分两份转移至预先孵育有anti-Flag抗体的 96孔板 中，室温孵育1小时。洗涤三次之后, 加入HRP标记的磷酸酪氨酸抗体室温孵育1 小时。然后用含有0.5%吐温-20和2 mM MgCl2的TBS洗3次.加入50 μL 2N H2SO4终止反应，利用分光光度计测量485 和530 nm处的信号。

动物实验

• Animal Models:携带4T1细胞的BALB/c小鼠
• Formulation:溶于0.6%甲基纤维素 /0.5% 吐温 80，现用现配
• Dosages:30 mg/kg/天, 100 mg/kg/天和300 mg/kg/天
• Administration:口服