PHA-793887

PHA-793887是一种新型有效的CDK2，CDK5和CDK7抑制剂，IC50分别为8 nM， 5 nM 和10 nM，作用于CDK2， 5，和7比作用于CDK1， 4，和9选择性高6倍以上。

特性

PHA-793887是新型有效的二代CDK抑制剂。

靶点

体外研究

PHA-793887抑制许多肿瘤细胞系增殖，包括A2780, HCT-116, COLO-205, C-433, DU-145, A375, PC3, MCF-7, 和BX-PC3, IC50为88nM–3.4 μM。PHA-793887作用于白血病细胞系包括K562, KU812, KCL22, 和TOM1时有细胞毒性, IC50为0.3–7 μM, 但是作用于正常未受刺激处理的外周血单核细胞或CD34+造血干细胞时没有细胞毒性。PHA-793887作用于白血病细胞系具有高活性， IC50< 0.1 μM。PHA-793887诱导细胞周期停滞，抑制Rb和核磷蛋白磷酸化, 0.2−1 μM时调节cyclin E和cdc6表达，5 μM时诱导凋亡。

体内研究

PHA-793887(10–30mg/kg)作用于人类卵巢癌A2780,结肠癌HCT-116,和胰脏癌BX-PC3移植瘤模型具有高效性。PHA-793887(20mg/kg)作用于携带K562和HL60细胞的移植瘤模型, 原代白血病扩散细胞模型,和复发Philadelphia-阳性急性淋巴性白血病患者体内获得的高负担扩散性ALL-2模型具有高效性。

1 mg

5 mg

10 mg

1 mM

2.7664 mL

13.8320 mL

27.6640 mL

5 mM

0.5533 mL

2.7664 mL

5.5328 mL

10 mM

0.2766 mL

1.3832 mL

2.7664 mL

50 mM

0.0553 mL

0.2766 mL

0.5533 mL

CDK激酶实验:
在激酶buffer中加入ATP/33Pγ-ATP混合物,底物,和特定酶(0.7−100 nM)，最终体积为30 μL, 然后加入PHA-793887 (1.5 nM–10 μM)室温下反应30到90分钟。温育后，反应停止，使用SPA, Dowex树脂, 或Multiscreen磷酸纤维素滤膜，从未渗透的放射性ATP中分离磷酸化底物，方法如下：(1) SPA实验。加入100 μL PBS，32 mM EDTA，0.1% TritonX-100，500 μM ATP,和1 mg链霉素包被的SPA片，终止反应。温育20分钟，获取底物后，100 μL反应混合物转移到包含100 μL 5 MCsCl的Optiplate 96孔板上, 竖立4小时使分层到板的另一端，使用TopCount 测量磷酸化底物。(2) Dowex树脂实验。加入150 μL树脂/甲酸盐, pH为3.00,终止反应，获取未反应的33Pγ-ATP, 在溶液中从磷酸化底物中分离。60分钟后，50 μL上清液转移到Optiplate 96孔板上。加入150 μLMicroscint40,使用TopCount计算放射性。(3) Multiscreen实验。加入10 μL EDTA (150 mM)，终止反应。100 μL 转移到MultiScreen板上，使底物结合到磷酸纤维素过滤器上。用MultiScreen过滤系统过滤的100 μL H2PO4(75 mM)冲洗板，冲洗三次。烘干，加入100 μL Microscint 0,使用TopCount计算放射性。通过回归曲线分析IC50值。

细胞实验

• Cell lines:A2780细胞
• Concentrations:0.1 nM–1 μM, 溶于DMSO.
• Incubation Time:72小时
• Method:细胞接种在96或384孔板上，每cm2浓度为1×104到3×104。24小时后，用连续稀释的PHA-793887处理细胞。处理72小时后，通过CellTiter-Glo实验测定细胞数。使用sygmoidal设备测定IC50值。
  (Only for Reference)

动物实验

• Animal Models:携带人类卵巢癌A2780,结肠癌 HCT-116和胰脏癌BX-PC3细胞的鼠移植瘤模型
• Formulation:溶于5%葡萄糖溶液中
• Dosages:10, 20, 和30 mg/kg
• Administration:静脉注射，每天一次。