Necrostatin-1；Necrostatin1
分子式：C13H13N3OS分子量：259.33
简介： Necrostatin-1是一种有效，选择性和可渗透细胞的坏死性凋亡 (necroptosis) 抑制剂，它通过抑制坏死性凋亡途径中的死亡域受体激酶RIP (RIP1) 起作用。
别名：Nec-1；4-Imidazolidinone, 5-(1H-indol-3-ylmethyl)-3-methyl-2-thioxo
物理性状及指标：
外观：………………淡黄色至黄色固体
溶解性：……………DMSO：51 mg/mL warmed (196.66 mM)；Water Insoluble；Ethanol Insoluble
含量：………………>98%
储存条件： -20℃，避光防潮密闭干燥
运输条件：2~8℃运输
生物活性
| 产品描述 |
Necrostatin-1是特异性的RIP1抑制剂，抑制TNF-α诱导的坏死，EC50为490 nM。 |
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靶点 |
RIP1 |
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IC50 |
490 nM (EC50) |
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体外研究 |
Necrostatin-1 (1-100 μM)抑制过表达和内源性的RIP1发生自磷酸化。RIP1是初级细胞靶点，负责Necrostatin-1的抗细胞坏死活性。Necrostatin-1有效抑制多种类型细胞触发的坏死性细胞死亡。Necrostatin-1作为细胞坏死的小分子抑制剂,作用于jurkat细胞，抑制RIP激酶的诱导细胞坏死，抑制TNF-α诱导的细胞坏死，EC50为490 nM。 |
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特征 |
Necrostatin-1是抑制细胞坏死的有力工具。 |
用途及描述 ：科研试剂，广泛应用于分子生物学，药理学等科研方面，严禁用于人体。 Necrostatin-1是特异性的RIP1抑制剂，抑制TNF-α诱导的坏死，本品可用于相关领域的科研实验。
储液配置
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1 mg |
5 mg |
10 mg |
| 1 mM | 3.8561 mL | 19.2805 mL | 38.5609 mL |
| 5 mM | 0.7712 mL | 3.8561 mL | 7.7122 mL |
| 10 mM | 0.3856 mL | 1.9280 mL | 3.8561 mL |
| 50 mM | 0.0771 mL | 0.3856 mL | 0.7712 mL |
经典实验操作（仅供参考）
| 激酶实验 | RIP1 激酶检测: RIP1 的磷酸化需要其激酶活性。FLAG标记的野生型(WT)或RIP1(K45M) 突变体失活激酶的表达结构转染到293T细胞中，在有[γ-32P]ATP存在时，RIP1激酶实验在30°C下进行30分钟。样品进行SDS-PAGE，通过放射自显影可观察到RIP1带。对放射性带的相对强度进行量化，并显示比率。在激酶反应的同时，珠样本使用anti-RIP1抗体进行Western Blot分析，确保与激酶反应中等量的蛋白。 |
| 细胞实验 |
细胞接种在96孔板中（白色板进行发光检测;黑色板进行荧光检测;空白板进行MTT实验）贴壁细胞按每孔5000-10000个细胞的密度接种，悬浮细胞按每孔20,000-50,000个细胞的密度接种，孔中含100 μl合适的无酚红培养基。温育后，使用如下方法之一测定细胞存活率。ATP 实验中，使用购买的发光试剂盒，并使用Wallac Victor II酶标仪分析发光值。Sytox实验中,细胞与 1 μM Sytox Green试剂在37°C下温育30分钟,然后进行荧光读数。随后，增加5 μl 20% Triton X-100溶液到每孔中，产生最大溶解，细胞37°C下温育1小时，然后进行二次读数。Triton处理前和后，计算值的比率。MTT实验，使用CellTiter 96 AQueous 非放射性细胞增殖检测试剂盒。PI排除实验中, 加入2 μg/ml PI 到培养基中，立即使用FACSCalibur分析样品。PI-膜联蛋白V 实验中，使用ApoAlert Annexin V-EGFP 凋亡试剂盒。进行DioC6染色, 细胞与40 nM DiOC6在37°C下温育30分钟, 洗涤一次，使用FACSCalibur分析。ROS分析中, 细胞与5 μM Dihydroethidium在37°C下温育30分钟, 洗涤一次，使用FACSCalibur分析。 |
【注意】
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