PD98059

PD98059是非ATP竞争性的MEK抑制剂，IC50为2 μM,特异性抑制MEK-1调节的MAPK激活;不直接抑制ERK1或ERK2。

靶点

MEK1

IC50

2 μM

体外研究

PD98059要么抑制本底的MEK1，要么抑制一种被部分激活的MEK突变体，该突变体是218和222号位上丝氨酸突变为谷氨酸后形成的(MEK-2E)，IC50为2 μM. PD98059不会抑制JNK和P38这两个MAPK的同系物. PD98059会高度选择性的抑制MEK,因为对其它包括Raf激酶, cAMP-依赖性激酶,蛋白激酶C, v-Src,表皮生长因子(EGF)受体激酶,胰岛素受体激酶, PDGF受体激酶,和磷脂酰肌醇(-3)激酶等在内的一系列激酶都没有抑制性。PD98059会抑制经过PDGF刺激而活化的MAPK和胸苷进入3T3细胞，IC50分别为~10 μM和~7 μM。PD98059可以有效地阻止MEK1被Raf或者MEK激酶活化，IC50为4 μM,可以微弱地抑制MEK2被Raf活化，IC50为50 μM。在KB和PC12细胞中, PD98059不会抑制MKK4和RK激酶这两个参与压力和白细胞介素-1介导的激酶级联反应的MEK的同系物的活化，在Swiss 3T3细胞中也不会通过胰岛素或者表皮生长因子抑制p70 S6激酶的活化。PD98059会在不改变细胞生存能力的情况下完全阻断神经生长因子(NGF)诱导的PC12细胞的分化。PD98059会以剂量依赖性的方式抑制培养在含有破骨细胞分化因子培养基中的RAW264.7细胞的增值，进而导致TRAP阳性细胞数量明显下降。

体内研究

在大脑缺血前30分钟用PD98059处理小鼠可以明显减轻伤害,使脑梗塞的体积减小。基于胰腺的湿重和组织学研究发现，提前30分钟用PD98059预处理(10 mg/kg静脉注射)然后每小时注射一次蛙皮素连续三次的小鼠可以明显改善蛙皮素诱导的急性胰腺炎。卡拉胶损伤一小时后用PD98059 (10 mg/kg)对小鼠进行治疗可以发现与炎症相关的所有指标均有所下降。

特征

PD98059不会抑制已经被c-Raf磷酸化的MEK1

1 mg

5 mg

10 mg

1 mM

3.7414 mL

18.7070 mL

37.4139 mL

5 mM

0.7483 mL

3.7414 mL

7.4828 mL

10 mM

0.3741 mL

1.8707 mL

3.7414 mL

50 mM

0.0748 mL

0.3741 mL

0.7483 mL

体外MEK激酶活性测定:
在含有44-kDa GST-MAPK 或者45-kDa GST-MEK1的体系中检测32P被掺入蛋白 MBP中的情况。 反应体系50 μL ，含有50 mM Tris, pH 7.4/10 mM MgCl2/2 mM EGTA/10 μM [γ-32P]ATP， 加入10 μg GST-MEK1, 0.5 μg GST-MAPK和 40 μg MBP。30°C 孵育15 分钟, 加入Laemmli SDS 样品缓冲液终止反应。磷酸化的MBP 进行10% SDS-PAGE分析

细胞实验

• Cell lines:K-Balb, KNRK, v-raf-3Y1, SRA/3Y1, EGFR/3T3, 和K562
• Concentrations:溶于DMSO, 终浓度~100 μM
• Incubation Time:3 天, 或者7-10天
• Method:细胞按10,000-20,000个/mL的密度接种在多孔平板中进行单层生长。48小时后把不同浓度的PD98059 加到细胞培养基孵育3天。 然后通过胰酶将细胞从平板中消化下来并用Coulter 计数器计数。 将细胞按5,000-10,000每皿的浓度接种在35 mm的培养皿中，培养基中含有0.3% 的琼脂和期望浓度的PD98059，让细胞在软琼脂上生长.经过7-10天的生长, 可以借助解剖显微镜将可见的菌落数出来。

动物实验

• Animal Models:患有急性胰腺炎的雄性Sprague–Dawley 大鼠
• Formulation:溶于 DMSO, 用生理盐水稀释
• Dosages:10 mg/kg
• Administration:静脉注射