Vismodegib;GDC-0449

GDC-0449有效抑制hedgehog通路，是一种新型及特定合成的小分子抑制剂，IC50为3 nM。

靶点

Hedgehog (Cell-free assay)

IC50

3 nM

体外研究

GDC-0449有效抑制hedgehog通路，是一种新型及特定合成的小分子抑制剂，IC50为3nM。GDC-0449作用于Hedgehog信号通路，阻断Hedgehog配位体，即细胞表面受体PTCH及SMO的活性，从而阻断Hedgehog信号通路。在组织生长和修复方面，Hedgehog信号通路意义重大。Hedgehog通路信号的异常激活，及不受控制的细胞增殖，可能与Hedgehog配位体，即细胞表面受体PTCH及SMO的突变有关。在体外，GDC-0449在不抑制胰脏细胞增殖的前提下阻止原代胰脏移植物的生长，这项结果最近已经应用到临床。GDC-0449也抑制ABCG2, P-糖蛋白,及和MDR有关联的重要MRP1 ABC载体。GDC-0449也阻断其他多种ABC载体。ABC载体属于一个膜蛋白家族，它的过量表达和耐药性有关，这也是治疗癌症的一个重大障碍。GDC-0449强抑制两种ABC载体，ABCG2/BCRP和ABCB1/P-糖蛋白，也温和抑制ABCC1/MRP1。在ABCG2过量表达的HEK293细胞中, GDC-0449可以提高荧光ABCG2底物BODIPY-哌唑嗪的保持力，也可用米托蒽醌再次处理这些细胞，产生抗肿瘤的ABCG2底物。实验使Madin-Darby犬的肾脏细胞中过量表达P糖蛋白或者MRP1，GDC-0449提高了钙黄绿素-AM的保持力，然后载用秋水仙素处理这些细胞。另外，用米托蒽醌,托泊替康,SN-38处理的过量表达ABCG2的人类非小细胞肺癌细胞NCI-H460/par和NCI-H460/MX20，用GDC-0449再次处理。GDC-0449作用于ABCG2和Pgp的IC50值分别为1.4μM和3.0 μM。GDC-0449改变细胞内Ca2+平衡，且作用于抗cisplatin的肺癌细胞，抑制细胞生长。

体内研究

GDC-0449已经用于治疗动物模型的成髓细胞瘤。GDC-0449抑制原代胰腺移植瘤生长，但是不抑制细胞增殖。GDC-0449按25 mg/kg以上剂量口服给药髓母细胞瘤Ptch(+/-)异体移植物模型，引起细胞衰退，按92 mg/kg剂量处理两种配位体依赖的结肠直肠癌模型D5123和1040830，每天处理两次，抑制肿瘤生长。分析Hh通路活性和PK/PD模型显示GDC-0449抑制Gli1，IC50值与GDC-0449作用于髓母细胞瘤和D5123模型的IC50值差不多(分别为0.165 μM ±11.5%和0.267 μM ±4.83%)

MK-4101

MB6516

Cyclopamine

MB4139

HPI-4 (Ciliobrevin A)

1 mg

5 mg

10 mg

1 mM

2.3736 mL

11.8680 mL

23.7361 mL

5 mM

0.4747 mL

2.3736 mL

4.7472 mL

10 mM

0.2374 mL

1.1868 mL

2.3736 mL

50 mM

0.0475 mL

0.2374 mL

0.4747 mL

• Cell lines:MDCKII细胞
• Concentrations:20 μM
• Incubation Time:2小时
• Method:MDCKII细胞按每孔3×105密度接种在24孔板中。培养液包含不同药物，实验组为50 µM VP,50 µM吲哚美辛,或者20 µM GDC-0449溶解在DMSO中，对照组只含有DMSO。然后加入非荧光的钙黄绿素-AM，最终浓度达到1.0 µM。然后在37oC温育2小时。细胞用含Ca2+,Mg2+的Hank’s平衡盐溶液buffer冲洗2次，然后震荡1小时溶解在含0.01% Triton X-100的磷酸缓冲液中，然后放在4oC下过夜。溶解的物质然后转移到96孔板上，钙黄绿素引起的荧光信号用分光光度法定量。所有的实验操作需在暗中进行，所有的读数用平均值±SEM表示。

动物实验

• Animal Models:Ptch(+/-)异体移植物模型
• Formulation:In 0.5% methyl-cellulose, 0.2% tween-80
• Dosages:25 mg/kg,92 mg/kg
• Administration:口服