AVL292

CC-292 (AVL-292)是一个通过共价结合的，可以口服，并且具有高度选择性的BTK抑制剂，其IC50小于0.5 nM，展示了比其他被测激酶至少1400倍的选择性。

特性

口服生物可利用的btk选择性抑制剂，已在治疗复发或难治性b-nhl、cll和wm的第一阶段临床试验中进行试验。

靶点

体外研究

AVL-292在Ramos细胞中对BTK产生了剂量依赖性的抑制作用，其EC50为8 nM；并且抑制了下游的BCR通路。AVL-292通过抑制BTK的活性，进一步的抑制了B细胞的增殖，其EC50为3 nM。

体内研究

在胶原蛋白诱导的小鼠关节炎模型中，AVL-292 (3- 30 mg/kg, p.o.)剂量依赖性的抑制了这类炎症的临床症状，包括关节和爪子的肿胀度以及受影响爪子发红症状的减少。

依鲁替尼(PCI32765)

MB4286

Acalabrutinib(ACP-196)

1 mg

5 mg

10 mg

1 mM

2.3616 mL

11.8080 mL

23.6161 mL

5 mM

0.4723 mL

2.3616 mL

4.7232 mL

10 mM

0.2362 mL

1.1808 mL

2.3616 mL

50 mM

0.0472 mL

0.2362 mL

0.4723 mL

BTK OMNIA测试过程:
实验条件包括，40 μM ATP (1X KMATP), 10 μM Y5-Sox, and 10 nM BTK酶. 简言之, 将由1.13X ATP and the Y5 Sox组成的底物混合物放入由20 mM Tris, pH 7.5, 5 mM MgCl2, 1 mM EGTA, 5 mM β-甘油磷酸, 5% 甘油, 和0.2 mM DTT组成的1X Omnia激酶反应缓冲液中. 关于IC50测定, 将5 μL酶和以三倍比例稀释的抑制剂放入到50% DMSO中，25°C孵育30 min. 激酶反应从加入45 μL ATP/Y5 底物混合物开始计时，用Synergy 4 plate reader在λex360/λem485处检测60分钟。 将每个小孔的反应根据GraphPad软件制作成动力学曲线从而计算出IC50值.

细胞实验

• Cell lines:人源B细胞
• Concentrations:~1000 nM
• Incubation Time:72 hours
• Method:用负选择的方式分离天然人源B细胞并用RPMI稀释为0.4–0.5 × 106cells/ml的悬浮液。将细胞与α-human IgM (每孔终浓度5 μg/ml）混合，然后加入DMSO 或者 AVL-292 (每孔终浓度分别为0.01, 0.1, 1.0, 10.0, 100.0, 1000 nM )，放入96孔板中. 细胞在37°C，5% CO2的培养箱中孵育56小时. 然后加入3H-Thymidine(每孔终浓度1 μCi), 培养过夜后检测3H含量. 实验进行三次。