ML130 (Nodinitib-1)

ML130 (Nodinitib-1)是一种有效的，选择性的NOD1抑制剂，IC50为0.56 μM，抑制NF-κB激活，比作用于NOD2选择性高36倍。

靶点

体外研究

ML130可以选择性抑制HEK293细胞中NOD1诱导的NF-κB 激活并且没有细胞毒性，已被选为潜在的探针分子。在第二项实验中也证实ML130可以选择性抑制NOD1依赖的IL-8 分泌和NOD1依赖的NF-κB激活通路。另外一项研究发现ML130 可以引起 NOD1体外构象改变和它的细胞内亚细胞定位，这为研究NOD1活性调节机制提供了一种化学探针同时也为研究NOD1在多种感染和炎症疾病中的作用提供了一种工具。

1 mg

5 mg

10 mg

1 mM

3.4802 mL

17.4010 mL

34.8020 mL

5 mM

0.6960 mL

3.4802 mL

6.9604 mL

10 mM

0.3480 mL

1.7401 mL

3.4802 mL

50 mM

0.0696 mL

0.3480 mL

0.6960 mL

NOD1 剂量反应分析:
第一天实验流程 ：1) 带有NFKB-Luc的 HEK-293-T长满后收集细胞2) 加入带有Multidrop的 NOD 分析培养基3) 1000 rpm 离心1分钟4) 连续稀释药物溶液5)细胞悬液中加入0.75μg/mL gamma-tri-DAP. 6)在TC处理过的平板中每孔接种13000 个细胞7) 500 RPM离心5分钟。第二天实验流程：1)每孔加入3μL含有Multidrop的SteadyGlo 溶液。2) 在摇床上将平板摇晃20 分钟。3) 将平板1000 RPM离心1分钟。4) 记录荧光数值。利用GraphPad Prism 5.0来计算IC50值，屏幕平均Z’为0.6, 背景信号11.1, 噪音信号78.6，窗口信号 6.0。

细胞实验

• Cell lines:Fa2N-4 细胞
• Concentrations:~50 μM
• Incubation Time:24小时
• Method:在Fa2N-4永生人源肝细胞中利用ATP-lite一步分析法荧光试剂盒检测药品的肝毒性。将Fa2N-4 细胞按50,000 个/孔的密度接种在含有MFE培养基的培养板中与不同浓度的药品(0.01 µM-50 µM)孵育24小时，孵育条件37℃, 5% CO2。实验最后加入D-荧光素和荧光素酶。利用Infinite M200酶标仪检测荧光信号来反应实验中捕获的细胞内ATP量。利用统计软件包Prism4与抑制剂对数与可变斜率的响应方程进行不同药物半致死量的非线性回归分析。