SEA-0400

SEA0400 是一种新颖的，具有选择性的Na+-Ca2+exchanger抑制剂，在培养的神经元、星形胶质细胞和小胶质细胞中，能够抑制 Na+-依赖性 Ca2+的吸收，IC50值为 5-33 nM。

靶点

IC50: 5-33 nM (NCX)

体外研究

SEA040抑制培养神经元、星形胶质细胞和小胶质细胞中钠依赖性45Ca2+的摄取。SEA0400的IC50值为33纳米（神经元）、5.0纳米（星形胶质细胞）和8.3纳米（小胶质细胞）。SEA040阻止硝普钠（SNP）增加ERK和p38 MAPK磷酸化，并以细胞外Ca2+依赖性方式产生活性氧（ROS）。

体内研究

SEA040（3mg/kg+3mg/kg/h，持续2h，静脉注射）减弱了脑皮质和纹状体的梗死体积，不影响麻醉大鼠皮质平均血流。SEA0400对MPTP处理的C57BL/6J小鼠的多巴胺能神经毒性（由中脑和纹状体中的多巴胺水平、黑质和纹状体中的酪氨酸羟化酶免疫反应性、纹状体多巴胺释放和运动缺陷决定）具有保护作用。

1 mg

5 mg

10 mg

1 mM

2.6927 mL

13.4633 mL

26.9266 mL

5 mM

0.5385 mL

2.6927 mL

5.3853 mL

10 mM

0.2693 mL

1.3463 mL

2.6927 mL

如前所述，通过测定钠依赖性45Ca2+摄取来测定钠离子交换活性。简言之，细胞在汉克斯平衡盐水（HBSS）中预培养20分钟，然后将培养基转移到含有45Ca2+的HBSS中培养5分钟。为了提高细胞内钠离子浓度，使用1 mM的哇巴因加20μM的莫能菌素（用于星形细胞和小胶质细胞）和10μM的莫能菌素（用于神经元）。莫能菌素与同位素同时加入。在星形胶质细胞和小胶质细胞莫能菌素前5分钟加入哇巴因。在莫能菌素前5分钟加入SEA040和KB-R7943，在45Ca2+摄取反应中出现。

细胞实验

将SEA0400溶解在DMSO中（终浓度0.1％）。
将在96孔组织培养板中铺板的细胞在含有10μMH2DCF-DA和0.25μg/ mL Cremophor EL的正常或无Ca2 + HBSS中于37℃温育30分钟，然后用正常HBSS漂洗两次至 去除多余的染料。 将细胞在正常HBSS中再灌注1小时，并且通过ROS（可能是H 2 O 2和羟基自由基）将H 2 DCF-DA转化为其荧光产物二氯荧光素，使用Wallac Multilabel计数器在485nm激发和535nm发射测定。 ROS产生表示为对照细胞的百分比。 在实验之前使用H 2 O 2确认ROS测定的线性和灵敏度。 在Ca 2+再灌注前10分钟加入指定浓度的SEA0400，直至测定。

动物实验

SEA0400配置成含有20％大豆油的脂质乳液，给药。
雄性Sprague-Dawley大鼠体重289至325g，用1%至2%的氟烷麻醉。将导管插入股动脉并连接到压力传感器以记录血压。用激光多普勒流量计测量局部皮质血流量，探头放置在胸部后方2 mm和侧面6 mm处。SEA0400或其同等体积的载体在3 mg/kg下静脉注射，然后在正常条件下以3 mg/kg/h注射2 h，无MCA阻塞。