PD184352 (CI-1040)

PD184352 (CI-1040)是一种ATP非竞争性的MEK1/2抑制剂，细胞试验中IC50为17 nM，对MEK1/2的选择性比MEK5高100倍。

特性

首个开始临床开发的MEK抑制剂。

靶点

体外研究

CI-1040治疗使多重肿瘤细胞，包括结肠26，BX-PC3 胰腺癌，A431 子宫颈癌，HT-29结肠癌， ZR-25-1乳腺癌和SKOV-3 卵巢癌细胞中pMAPK 水平降低。CI-1040治疗不抑制Jun激酶，p38 激酶或Akt的磷酸化作用，这表明CI-1040特定作用于MEK。CI-1040对MAPK活化的抑制阻止细胞周期进程，并诱导G1期阻滞。CI-1040抑制MEK1的IC50为0.3 μM，比抑制Swiss 3T3细胞中EGF诱导的ERK2活化所需的浓度高15倍。这些结果表明CI-1040通过抑制MKK1活化，而不是通过阻断MKK1活性对细胞发挥作用。2 nM PD184352抑制Swiss 3T3细胞中50%的MKK1活化，而超过100倍浓度的CI-1040在体外抑制MEK1。PD184352也会抑制Raf催化的MEK1磷酸化，而对Raf催化的髓鞘碱性蛋白磷酸化没有作用。与仅用DMSO处理的细胞相比，CI-1040抑制86%甲状腺乳头状癌(PTC)细胞生长，10μM浓度时导致RET/PTC1重排。CI-1040对PTC细胞(BRAF 突变)表现出有效的抑制作用，GI50为52 nM，但是对RET/PTC1重排型活性较低，GI50 为1.1 μM。一项最近的研究表明CI-1040增加CML 急变期细胞系，K562，和初级慢性期CD34+ CML细胞中BMS-214662的凋亡作用。

体内研究

CI-1040口服给药减弱小鼠和人结肠肿瘤异种移植物的生长，具有48-200 mg/kg每剂的广泛剂量范围，但是对P388白血病没有作用。CI-1040口服给药(300 mg/kg/d)3周后，抑制来自PTC细胞的肿瘤异种移植物，与未处理的(仅载体处理)小鼠相比，使携带BRAF突变型的移植物减少31.3%，携带RET/PTC1重排型的移植物减少47.5%。小鼠用CI-1040处理时，没有观察到毒性作用。乳腺肿瘤对CI-1040和UCN-01的瞬时暴露引起肿瘤细胞体内死亡，并延长对肿瘤再生长的抑制。CI-1040 (25 mg/kg) 和UCN-01 (0.1-0.2 mg/kg)的联合治疗显著减少MDA-MB-231，并很大程度上废除植入无胸腺小鼠的MCF7肿瘤生长，而任何单一治疗都没有显著活性。联合用药引起显著的肿瘤细胞死亡，这与ERK1/2的磷酸化和Ki67与CD31的免疫活性降低相一致。

1 mg

5 mg

10 mg

1 mM

2.0891 mL

10.4456 mL

20.8912 mL

5 mM

0.4178 mL

2.0891 mL

4.1782 mL

10 mM

0.2089 mL

1.0446 mL

2.0891 mL

50 mM

0.0418 mL

0.2089 mL

0.4178 mL

MEK1 试验:
MAP激酶被MEK磷酸化后活化；活化的MAP激酶随后使髓鞘碱性蛋白(MBP)磷酸化。32P整合到髓鞘碱性蛋白(MBP)的测定在包含44-kDa MAPK (GST-MAPK)或45-kDa MEK (GST-MEK1)的谷胱甘肽S-转移酶(GST)融合蛋白存在下进行。试验在包含10 μg GST-MEK1，0.5 μg GST-MAPK，和40 μg MBP的50μL 50 mM Tris，pH 7.4/10 mM MgCl2/2 mM EGTA/10 μM [γ-32P]ATP中进行。30°C下培养15分钟后，加入Laemmli SDS样品缓冲液停止反应。磷酸化的MBP通过SDS/10% PAGE溶解。这种筛选作用使几种小分子MEK抑制剂被发现，例如CI-1040。评估加入顺序的实验表明CI-1040直接抑制MEK1，50%抑制浓度(IC50)为17 nM，而不影响MAPK活性。

细胞实验

• Cell lines:Colon 26肿瘤细胞
• Concentrations:0.1-10 μM
• Incubation Time:24小时
• Method:将细胞接种在T-75 cm2烧瓶，第二天用DMSO或CI-1040处理24小时。收集单细胞悬浮液，并且将沉淀在冰乙醇 (70%)中固定30分钟。样品离心后，将碘化丙啶(50μg/mL)和RNase (30 units/mL)加入沉淀物中，37℃下培养20分钟。过滤后，样品通过流式细胞仪分析。

动物实验

• Animal Models:无胸腺小鼠的PTC细胞
• Formulation:聚氧乙烯蓖麻油–95% 乙醇(50:50)，在水中稀释
• Dosages:150 mg/kg
• Administration:口服，一天两次