Ruxolitinib(INCB018424) phosphate

Ruxolitinib (INCB018424)是第一个应用于临床的，有效的，选择性JAK1/2抑制剂，在无细胞试验中IC50为3.3 nM/2.8 nM。作用于JAK1， JAK2与作用于JAK3相比，选择性高130多倍。

靶点

体外研究

在Ba/F3细胞和HEL细胞中，INCB018424有效地和有选择性地抑制JAK2V617F介导的信号传导和细胞增殖。INCB018424以剂量依赖性的方式显着地增加Ba/F3细胞的细胞凋亡。在Ba/F3细胞中，INCB018424(64 nM)致使线粒体去极化细胞增加一倍。INCB018424抑制来自正常捐助者和真性红细胞增多症患者的红细胞前体细胞的增殖，IC50分别是407 nM 和223 nM。 INCB018424有效抑制红细胞集落形成，IC50是67 nM。

体内研究

INCB018424（180 mg/kg，口服，每日两次）导致JAK2V617F驱动的小鼠模型的生存率在处理22天后大于90％。在JAK2V617F驱动的小鼠模型中，INCB018424（180 mg/kg，口服，每日两次）显着降低脾脏肿大和炎症因子的循环水平，并优先消灭肿瘤细胞，造成显著延长的生存期，无骨髓抑制或免疫抑制作用。在骨髓纤维化的双盲试验中，Ruxolitinib组的主要终点达到41.9％，安慰剂组则为0.7％。 Ruxolitinib导致脾体积持续减少和总症状得分提高50％或更多。在Ruxolitinib（15 mg，每天两次）组内，共28％骨髓纤维化患者至48周时脾脏体积减少至少35％，而接受最好的治疗组的比例为0%。Ruxolitinib致使脾脏长度减少了56％，而接受最好的治疗组却增加了4％。Ruxolitinib组患者的生活质量得到提高和骨髓纤维化相关症状减少。

S-Ruxolitinib (INCB018424)

MB5446

氢溴酸达非那新

1 mg

5 mg

10 mg

1 mM

3.2640 mL

16.3201 mL

32.6403 mL

5 mM

0.6528 mL

3.2640 mL

6.5281 mL

10 mM

0.3264 mL

1.6320 mL

3.2640 mL

50 mM

0.0653 mL

0.3264 mL

0.6528 mL

结合试验:
重组蛋白是使用Sf21细胞和杆状病毒载体表达的，并通过亲和层析纯化。JAK激酶测定使用肽底物（-EQEDEPEGDYFEWLE）的均相时间分辨荧光测定法。酶反应是用Ruxolitinib或对照，JAK酶，500 nM肽，三磷酸腺苷（ATP; 1mM），和2％的二甲基亚砜（DMSO）反应1小时。 50％抑制浓度（IC50）时需要抑制50％荧光信号的INCB018424浓度。

细胞实验

• Cell lines:Ba/F3和HEL细胞
• Concentrations:3 μM
• Incubation Time:48小时
• Method:2×103细胞接种于的96孔板的一个孔中，用溶于DMSO的INCB018424（0.2％DMSO终浓度）在37℃和5% CO2条件下温育48小时。存活率是通过使用细胞滴度格洛荧光素酶试剂或活细胞计数器测定ATP水平。数值转换为相比对照的抑制百分率， IC50曲线使用Prism的GraphPad数据的非线性回归分析拟合。

动物实验

• Animal Models:JAK2V617F驱动的小鼠模型
• Formulation:5％二甲基乙酰胺，0.5％methocellulose
• Dosages:180 mg/kg
• Administration:口服