Temsirolimus;CCI-779;NSC 683864

1030.29

化学式

C56H87NO16

CAS号

162635-04-3

稳定性

3 years -20°C powder

75 mg/mL (72.79 mM)

DMSO

67 mg/mL (65.03 mM)

Water

Insoluble

1 mg

5 mg

10 mg

1 mM

0.9706 mL

4.8530 mL

9.7060 mL

5 mM

0.1941 mL

0.9706 mL

1.9412 mL

10 mM

0.0971 mL

0.4853 mL

0.9706 mL

50 mM

0.0194 mL

0.0971 mL

0.1941 mL

Temsirolimus (CCI-779, NSC 683864)是一种特定的mTOR抑制剂，在无细胞试验中IC50为1.76 μM。

靶点

体外研究

Temsirolimus抑制核糖体蛋白S6磷酸化,作用于PTEN阳性DU145细胞比作用于PTEN阴性PC-3细胞更有效,且抑制细胞生长，和细胞的克隆生存，这种作用存在浓度依赖性。Temsirolimus按100 ng/mL剂量处理原代人淋巴细胞性白血病(ALL) 细胞，显著抑制增殖，且诱导凋亡。在 FKBP12存在时, Temsirolimus 有效抑制mTOR 激酶活性，IC50为1.76 μM, 与Rapamycin（IC50为1.74 μM）类似。Temsirolimus按纳摩尔浓度(10 nM 到<5 μM) 处理，通过FKBP12依赖机制，具有适度的选择性抗增殖活性，在低微摩尔浓度 (5-15 μM)时，可以完全抑制多种肿瘤细胞增殖，涉及FKBP12非依赖性的 mTOR信号阻断。Temsirolimus 按微摩尔而不是纳摩尔浓度 (20 μM)处理，显著降低全部蛋白质合成，也显著降低多聚核糖体的分解, 伴随着翻译延伸因子 eEF2和翻译起始因子eIF2A的磷酸化快速提高

体内研究

Temsirolimus 按20 mg/kg 剂量腹腔注射，每周5天，显著延迟DAOY 移植瘤生长，与对照组相比，处理一周，延迟160%，处理两周，延迟240%。Temsirolimus按 100 mg/kg高剂量单独给药腹腔注射，一周内，诱导肿瘤体积衰退37%。 Temsirolimus 处理2两周，也延迟抗Rapamycin的U251移植瘤生长,延迟148%。Temsirolimus 作用于患Huntington疾病的小鼠模型，抑制mTOR，提高四种不同行为任务的表现，且降低聚合形成。 Temsirolimus处理8226, OPM-2,和 U266移植瘤的皮下生长，诱导显著的抗癌反应，这种作用存在剂量依赖性，作用于8226和 OPM-2移植瘤，ED50分别为20 mg/kg 和2 mg/kg，与抑制增殖和血管生长，诱导凋亡，和肿瘤细胞尺寸降低相关。每天按10 mg/kg剂量处理携带人ALL的NOD/SCID移植瘤模型，降低外周血膨胀和脾肿大

体外mTOR催化活性检测:
Flag标记的野生型人 mTOR (Flag-mTOR) DNA 结构短暂转染进HEK293 细胞。48小时后，进行蛋白提取和Flag-mTOR纯化。在体外，在不同浓度Temsirolimus存在而没 FKBP12 时，在96孔板上进行纯化的Flag-mTOR激酶实验，通过解离增强镧系荧光免疫分析(DELFIA)，使用His6-S6K1 作为底物来测量。在激酶实验 buffer (10 mM Hepes pH 7.4, 50 mM NaCl, 50 mM β-甘油磷酸,10 mM MnCl2, 0.5 mM DTT, 0.25 μM微囊藻素 LR, 和 100 μg/mL BSA)上第一次对酶进行稀释。每孔中，12 μL 稀释的酶与0.5 μL Temsirolimus混合。加入含ATP 和His6-S6K 的12.5 μL 激酶buffer开始激酶反应，终体积为25 μL，含800 ng/mL FLAG-mTOR, 100 μM ATP, 和 1.25 μM His6-S6K。反应板在室温下温和震荡温育2小时，加入 25 μL 终止液(20 mM Hepes pH 7.4, 20 mM EDTA, 和 20 mM EGTA)终止反应。磷酸化的(Thr-389) His6-S6K 的DELFIA 检测在室温下使用单克隆抗P(T389)-p70S6K抗体进行，抗体使用铕-N1-ITC (Eu) (每种抗体10.4 Eu)标记。45 μL终止的激酶反应混合物转移到含55 μL PBS的MaxiSorp板上。His6-S6K 粘附2小时后，吸除每孔，使用PBS冲洗。加入含40 ng/mL Eu-P(T389)-S6K 抗体的 100 μL DELFIA buffer。轻轻搅拌，再使抗体结合持续进行1小时。吸除每孔，然后使用含0.05% Tween-20(PBST)的PBS冲洗4次。每孔加入100 μL of DELFIA增强溶液，然后在 PerkinElmer Victor 模板酶标仪上读数。

细胞实验：

• Cell lines:A549, H157, H460, H446, HCT116, HT29, SW480, DLD1, Caco2, LNCap, DU145, MDA468, MDA231, HEK293, 和PC3-MM2
• Concentrations:溶于DMSO,终浓度为~20 μM
• Incubation Time:72小时
• Method:使用不同浓度Temsirolimus处理细胞72小时。处理后，通过MTS染料转换，使用CellTiter AQ 检测试剂盒测定存活细胞密度。

动物实验：

• Animal Models:皮下注射DAOY, 或U251细胞的雌性无胸腺裸鼠
• Formulation:在100% EtOH 作为50 mg/mL储存液中制备，然后在 5% Tween-80 和5% PEG 400中稀释
• Dosages:20 mg/kg
• Administration:每天注射，每周5次