PD169316

PD 169316 是一种高效，细胞透过的，有选择性的p38 MAP kinase抑制剂，IC50值为 89 nM。

靶点

IC50: 89 nM (p38 MAPK)

体外研究

PD169316（10μM）抑制TGFβ和激活素A，但不抑制CaOV3细胞中的BMP4信号传导。 PD169316（0.2-20μM）抑制TGFβ诱导的Smad2核转位，Smad7 mRNA诱导和CaOV3细胞中的报告基因活性。 PD169316（10μM）显示Nestin敲低细胞中的增殖速率显着增加，并且可以在没有EGF的情况下拯救Nestin敲低对细胞活力的影响[2]。 PD169316显着抑制p38 MAP激酶活性，而PC12细胞中ERK活性无显着变化。 PD169316（10μM）阻断分化的PC12细胞中营养因子戒断诱导的细胞凋亡。

体内研究

在Aβ注射后20天，PD169316（30ng /5μL）或与U0126组合联用改善注射Aβ的大鼠的MWM空间学习。与Aβ-注射组相比，U0126和PD169316预处理使erk和p38磷酸化形式的水平分别降低到77.7%和64.2%，并导致c-fos、p-creb、nrf-1和tfam蛋白水平显著增加。

MB5062

SB203580

MB4046

VX-702

1 mg

5 mg

10 mg

1 mM

2.7752 mL

13.8758 mL

27.7516 mL

5 mM

0.5550 mL

2.7752 mL

5.5503 mL

10 mM

0.2775 mL

1.3876 mL

2.7752 mL

在从分化的PC12细胞中去除大鼠1成纤维细胞或NGF中的血清16小时后，将细胞在无胰岛素（50 ng/ml）或存在胰岛素（50 ng/ml）的情况下在37°C下培养15分钟。用2 ml冰冷PBS洗涤后，将细胞溶解在400μl含有10 mM Tris、pH7.4、1%T的冰冷免疫沉淀缓冲液中。Riton X-100，0.5%非idet P-40，150 mM NaCl，1 mM EDTA，1 mM EGTA，0.2 mM原钒酸钠和0.2 mM苯甲基磺酰氟化物。将细胞溶解物离心以去除不溶性物质，将200μg上清液蛋白（400μl，总体积）与1μg抗p38抗体在4℃孵育1 h，然后再与30μl蛋白g+蛋白A-琼脂糖孵育1小时。将免疫复合物颗粒化，在免疫沉淀缓冲液中洗涤两次，然后在激酶缓冲液（50 mMβ-甘油磷酸、1 mM EGTA、20 mM MgCl2、100μM原钒酸钠）中洗涤一次。蛋白激酶测定是通过在20μl免疫复合物中添加20μl 2×反应缓冲液（50 mMβ-甘油磷酸、1 mM egta、20 mM m g c l 2、100μm原钒酸钠、0.1 m g/m l ATF-2（N端半）、50μg/m l ip20、C-AMP依赖性蛋白激酶肽抑制剂、200μm atp和0.9 mci/m l[32p]atp）开始的。该反应在30℃下进行10分钟，然后加入2×LaMMLI样品缓冲液，用12%丙烯酰胺凝胶进行SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳分析。电泳后，将凝胶干燥并进行磷成像。

动物实验

在实验中，成年雄性白化病大鼠体重210-280克。动物分为六组：（a）Aβ-注射组，接受双侧CA1注射Aβ（每侧30 ng/3μl PBS），单侧静脉注射DMSO（5μl/大鼠）4小时后，不接受任何治疗；（b）媒剂组，只接受侧脑室载体、DMSO和两个CA1区PBS（3μl/侧）。ONS；（c）ERK抑制剂组，接受静脉注射U0126（PBS中30μg/5μl 1%二甲基亚砜）和PBS注射（CA1中3μl/侧）；（d）p38抑制剂组，接受静脉注射PD169316（PBS中30μg/5μl 1%二甲基亚砜）和PBS注射（CA1中3μl/侧）；（e）接受静脉注射U0126的治疗组。（PBS中30μg/5μl 1%二甲基亚砜），海马内A注射前4小时（每侧30 ng/3μl PBS）；（f）接受静脉注射PD169316（PBS中30μg/5μl 1%二甲基亚砜）的治疗组，海马内A注射前4小时（每侧30 ng/3μl PBS）。上述两组进入两个实验方案：行为实验和分子研究。分子研究中所有动物组均为7天和20天实验组。